TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS

Técnicas coprológicas: La valoración parasitaria en muestras de materia fecal  se realiza a través de técnicas que indican la presencia o cuantifican el grado de infección causado por los parásitos.  Lo anterior y para mayor comprensión del tema, permite clasificar las técnicas coproparasitarias en técnicas cualitativas y técnicas cuantitativas. 

Técnicas cualitativas: Son de gran ayuda por poder realizarse en forma rápida durante el examen clínico, brindando elementos de fuerza para llegar a diagnósticos más precisos. Estas técnicas no indican la cantidad de parásitos existentes pero informan en términos cualitativos el grado de la infección.  Tradicionalmente  se ha utilizado el sistema de cruces según campos microscópicos para valorar el grado de infección, al igual que se hace para determinar presencia bacterias, hematíes y otras células en los exámenes de orina.

Algunos términos cualitativos que pueden orientar al clínico corresponden a Infecciones  bajas, leves, moderadas y graves.  Correspondiéndose con el sistema de cruces según el número de formas parasitarias así:

Infección baja:   (Campos con  1 a 3 formas)  =  Una cruz.  ( + )

Infección leve:   (Campos con  4 a 7 formas)  =   Dos cruces.  ( + + )

Infección moderada  (Campos con  8 a 10 formas) = Tres cruces (++ +)

Infección grave: (Campos con más de 10 formas)   = Cuatro cruces  (+++ +)

El número de formas para indicar el grado de infección es a criterio particular de quién realiza el examen al igual que el número de campos microscópicos observables.  Se recomienda hacer lectura de cinco campos escogidos al azar en la preparación o frotis. Los métodos comunes de técnicas cualitativas son los siguientes:

Frotis directo de heces

El método tiene entre sus características, la sencillez y rapidez para llevarlo a cabo, además de lo económico que resulta realizarlo, pues no requiere mucho material. Este método es muy utilizado para el diagnóstico de los protozoarios intestinales. En la práctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol, para la búsqueda e identificación de quistes, huevos y larvas, aunque en la práctica veterinaria se utilizan para el diagnóstico de estos últimos las técnicas, de flotación y sedimentación. Este método tiene una fuerte limitante: la muestra utilizada es tan pequeña, que es poco representativa.

Procedimiento:

ü  En un portaobjetos se colocan, por separado (en cada extremo), una gota de solución salina fisiológica y otra de lugol.

ü  Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solución salina, haciendo una suspensión homogénea.

ü  Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos.

ü  Se coloca el cubreobjetos.

ü  Se efectúa la misma operación en la gota de lugol.

ü  Se observa al microscopio.

       Método de Graban (técnica de la cinta scotch)

     Es un método cualitativo y muy útil para el diagnóstico de Dipylidium caninum. Consiste en la utilización de una cinta engomada trasparente, que se coloca alrededor del ano y de la zona perineal.

Procedimiento:

   Se corta un trozo de cinta de aproximadamente 5-6 cm, se impregna de material presente de las zonas mencionadas y finalmente se adhiere a un portaobjetos y se observa al microscopio con el objetivo de 10X. Se puede utilizar una gota de lugol, este se coloca levantando un extremo de la cinta, después se fija nuevamente a la laminilla. De esta manera se aclara la muestra y se obtiene un efecto de contraste con los huevos. 

  MÉTODOS DE FLOTACIÓN

   Los métodos de flotación fecal se utilizan para separar los parásitos en todos sus estadios (huevos, ooquistes, quistes, larvas) de otros objetos, basados en sus diferentes densidades. La densidad es el peso de un parásito u otro objeto por unidad de volumen, se expresa en forma de gravedad específica.

PROCEDIMIENTO

v Depositar una muestra de 3 a 4 gramos de heces a un vaso de plástico y homogenizar.

v  Administrar agua al vaso y con la ayuda de una cuchara de aluminio o plástico disolver la muestra.

v  Depositar el contenido a otro vaso a través de una coladera.

v  Depositar la muestra en un tubo de ensaye, y enrasar con otro tubo para centrifugar

v  Centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos, colocando frente a frente los tubos aforados.

v  Decantar los tubos y volver a aforar con solución saturada de Na Cl.

v  Volver a centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos.

v  Con la ayuda de un asa obtener unas gotas del sobrenadante, colocarlas sobre un portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos.

v  Observar al microscopio con el objetivo 10x y 40x.

v  Con el apoyo de imágenes de huevecillos, realizar la identificación de los parásitos que pudieran estar presentes en las muestras.

TECNICA DE SEDIMENTACION

   Desarrollará la técnica de sedimentación para llevar a cabo la identificación y diagnóstico de los trematodos y de cestodos en muestras (heces) obtenidas de animales Diferenciará los mecanismos fisiopatológicos de los trematodos y de los cestodos hacia el hospedero. Evaluar los daños ocasionados en hígados de decomiso (obtenidos en rastro), así como la identificación de Fasciola hepática en sus diferentes fases.

Técnica de McMaster

PROCEDIMIENTO

v  En un tubo Mc Master depositar solución saturada glucosada hasta la primera línea.

v  Depositar una muestra de heces hasta la segunda línea del tubo.

v  Depositar solución saturada hasta la tercera línea del tubo, cerrar y agitar hasta lograr un homogenizado completo.

v  Introducir una gasa para que cumpla la función de filtro o colador.

v  Con la ayuda de un gotero obtener el líquido que se encuentra dentro de la gasa y depositarlo en la cámara Mc Master cuidando que no se formen burbujas.

v  Colocar la cámara de Mc Master en el microscopio compuesto y enfocar las cuadriculas con el objetivo seco débil (10x).

v   Interpretar los resultados.